操作步驟：

　　細(xì)胞凍存步驟：

　　1. 常規(guī)方法收集對數(shù)期的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞于試管中。

　　2. 根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的密度和凍存管的大小確定所需凍存細(xì)胞數(shù)。

　　3. 將所需數(shù)目的細(xì)胞懸浮液置于離心管中，1000rmp，5分鐘離心收集培養(yǎng)細(xì)胞沉淀，*棄去離心管中的上清液。

　　4. 加入適量的CELLSAVING?細(xì)胞凍存液于離心管中，使細(xì)胞濃度約為5×105-1×107/ml。輕柔地混勻細(xì)胞，制成細(xì)胞混合液。

　　5. 將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)記的凍存管中，建議每管1ml或1.5ml。

　　6. 直接將分裝好的細(xì)胞凍存管放入-80℃超低溫冰箱中，可長期冷凍保存。

　　7. 如果想液氮中長期保存，需先放入-80℃冰箱至少一天時間，方可移至液氮罐中保存。

　　凍存細(xì)胞復(fù)蘇步驟：

　　1. 從冰箱中取出凍存的細(xì)胞，立即放入37℃水浴槽中快速解凍。

　　2. 待凍存管中細(xì)胞混合液*融化后，將其中的混合液移至離心管中，1000rmp，5分鐘離心收集凍存細(xì)胞沉淀，移去上清液（操作時 小心，切勿將細(xì)胞沉淀移去）。

　　3. 加入適量的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩加入到細(xì)胞沉淀，輕柔地混勻，將細(xì)胞混合液移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)容器中。

　　4. 鏡檢細(xì)胞后，可根據(jù)各自研究的需要和方法經(jīng)行細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)。

　　無血清細(xì)胞凍存液，含多種保護(hù)劑成分。一些保護(hù)劑，易于穿透細(xì)胞，避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞，同時另一些保護(hù)劑不能穿透細(xì)胞，但可以在冰晶形成之前，優(yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子，降低細(xì)胞外溶液的電解質(zhì)濃度，減少陽離子進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量，為多種保護(hù)劑組合，在細(xì)胞內(nèi)外進(jìn)行雙重保護(hù)，大大提高了細(xì)胞復(fù)蘇存活率。無血清細(xì)胞凍存液不含牛血清，無動物源組份。2-8℃即可穩(wěn)定保存，無需冷凍，即取即用。凍存細(xì)胞，無需程序降溫。凍存細(xì)胞復(fù)蘇率在90%以上。

　　以上內(nèi)容僅供參考，希望對您有所幫助！